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MILE米乐草莓黄单胞菌检测PCR试剂盒

来源:何睿晶 日期:2025-07-14

MILE米乐推出的这款产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒,具备以下独特特点:

MILE米乐草莓黄单胞菌检测PCR试剂盒

产品特点

1. 即开即用,用户仅需提供样品DNA模板,即可使用。

2. 引物及配件经过优化,具备高灵敏度。

3. 提供阳性对照,方便识别假阴性样本。

4. 特异性高,引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区,避免与其他生物样本DNA交叉反应。

5. 可用于定性及定量检测,定量时线性范围至少达到5个数量级。

6. 本产品包含足够的试剂用于50次20μL的探针法荧光定量PCR反应。

7. 本产品仅供科研使用。

使用方法

一、DNA提取(样本制备区)

使用自选方法提取和纯化样品DNA,此试剂盒与市场大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品(样本制备区)

为确保操作的规范性,阳性对照的稀释应在独立区域进行,以避免样品或本试剂盒其他成分的污染。

  1. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
  2. 用带芯枪头加入45μL DEPC-H2O。
  3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照,充分震荡1分钟,得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品,置于冰上待用。
  4. 更换枪头,在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照,充分震荡1分钟,得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品,置于冰上待用。
  5. 重复上述步骤,直至获得6个不同稀释度的标准曲线样品,置于冰上待用。如果无需制作标准曲线,阳性对照可直接稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制(试剂准备区)

若待检样品数量为N,准备N+2个qPCR管(N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照),向各PCR管中分别加入所需成分(详见说明书,欢迎索取)。

四、添加模板(模板添加区)

向每个qPCR管中加入2μL模板,添加顺序为阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照,然后离心30秒,立即进行扩增反应。

五、扩增反应(扩增及产物分析区)

将PCR管放置于PCR扩增仪的相应位置,进行扩增,扩增程序请参考详细说明书。

六、结果分析

1. 若制作了标准曲线,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴绘制标准曲线,通过待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值。

2. 如果未制作标准曲线,则可按以下标准判定结果:

  • 阳性对照:Ct值<30,呈现明显的指数增长,典型的S型曲线。
  • 阴性对照:Ct值≥38或无Ct值,无明显指数增长期和平台期。
  • 样本检测:Ct值<35显示有明显的指数增长,结果为阳性;Ct值在35-38范围需复检,如重复实验结果仍在该范围内则判定为阳性,否则为阴性。

运输及保存

此产品应低温运输,-20℃保存,保质期为一年。阳性对照应单独存放,以避免污染其他试剂。

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