IVT（InVitroTranscription）是mRNA生产工艺中最关键的步骤，优化的IVT体系不仅能够提高产量、减少物料用量和降低生产成本，还能确保mRNA分子的完整性、加帽率以及dsRNA杂质的掺入等核心质量指标，从而降低后续纯化的难度。在整个工艺环节中，IVT起着承上启下的重要作用。

IVT反应的整体过程相对简单，标准的IVT体系主要包括DNA模板、T7RNA聚合酶（T7RNAP）、NTPs、无机焦磷酸酶、RNase抑制剂及反应buffer。DNA模板通常为PCR产物或线性化质粒，涵盖T7启动子、5’UTR、CDS、3’UTR及Poly（A）等区域；NTP作为mRNA转录的底物，可更换为修饰核苷酸，以达到改善mRNA稳定性和免疫原性的目的。无机焦磷酸酶和RNase抑制剂是辅助成分，无机焦磷酸酶能够水解转录过程中产生的焦磷酸，从而提高反应效率，而RNase抑制剂则用于抑制可能的RNase污染。T7RNAP作为反应体系中的核心酶，负责识别DNA模板并催化mRNA的合成。

除了质粒模板的质量外，T7RNAP和buffer体系的配置是影响IVT效果的主要因素。T7RNA聚合酶的特异性使其能够精准识别T7启动子并独立完成转录，成为体外转录生产mRNA的理想选择。此外，MILE米乐通过设计实验，系统地探索了不同反应参数对常规mRNA和saRNA的产量及质量的影响，例如发现温度对长片段saRNA的完整度产生显著影响。

针对IVT体系的优化，MILE米乐采用了先进的酶定向进化平台进行选型，提升了T7RNAP的热稳定性，并通过实时监测技术评估转录效率。这一方法结合了基于荧光激活液滴分选技术（FADS）的平台，成功筛选出了多种具备优良特性的T7RNA聚合酶突变体，如耐热型和低dsRNA含量型，为后续的mRNA生产提供了有力保障。通过该平台，MILE米乐的突变体M16在52℃下展现出大幅提高的半衰期和催化活性，实现了高效的circRNA合成。

在优化IVT体系时，MILE米乐也特别关注反应buffer的配置。优化的buffer体系能够显著提升RNA聚合酶的活性、特异性和稳定性，从而保证RNA的质量和功能。研究显示，pH和Mg2+的浓度对IVT反应的影响尤为显著，MILE米乐通过精细调控这些参数，显著提高了mRNA的产量和完整度，为高产的体外转录提供了最佳条件。

当前，MILE米乐不仅提供高性能的mRNA疫苗和药物相关酶原料、化学底物和IVT试剂盒，还拥有完整的质控系统，可以为客户提供全套符合需求的解决方案。通过不断的技术创新和优化，MILE米乐致力于在mRNA合成领域快速响应客户需求，推动新药开发的进程。我们欢迎您随时咨询相关产品及服务，与MILE米乐携手共进！